羧基磁珠活化偶联蛋白时为何出现团聚

羧基磁珠活化偶联蛋白时为何出现团聚

1.羧基磁珠从样品管取出来就出现大颗粒，是什么原因？
答：正常条件下磁珠产品几乎不会团聚。磁珠产品使用前出现团聚现象，通常是因为在运输过程中磁珠自然沉降或黏壁后，固液分离使得磁珠无溶液浸润而干燥成团，再加溶液难以重悬分散。这种现象类似将磁珠冻存或者烘干，磁珠成团后超声处理也难分散。

2.羧基磁珠活化过程出现团聚？
答：出现这种现象可能有两个原因：(1) 未按推荐的活化剂浓度、用量和温度活化；活化速度太快，造成磁珠还没来得及分散均匀就开始活化后表面接近中性而团聚；(2) 活化前将磁珠洗涤干净后未尽快加活化剂溶液，磁珠吸附在管壁干燥成团而团聚；使用过程应严格避免磁珠干燥，去上清液后应立即加入所需溶液，并旋涡剧烈震荡混匀，最后再加入EDC，再旋涡剧烈震荡混匀，这样通常不会出现团聚。

3.偶联过程出现团聚？
答：出现这种现象主要有三种原因: (1) 磁珠活化并洗涤后未先加冰MES缓冲液重悬磁珠而直接加入了蛋白溶液，此时磁珠局部浓度过高且温度较高，蛋白偶联太快而交联团聚；需降温以降低偶联速度；(2) 将蛋白加入活化并洗涤磁珠中；应将活化并洗涤磁珠重悬，小量分批加入蛋白溶液中，偶联时维持蛋白绝对过量，避免一个蛋白分子偶联多个磁珠而出现团聚；(3) 蛋白溶液没有达到推荐浓度；蛋白浓度太低，偶联反应太快则容易出现团聚。

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