本发明提供一种两性解离离子交换分离介质,其表面为两性解离共价修饰层;环境pH值低于两性解离共价修饰层等电点时,两性解离共价修饰层的表面净电荷为正,具有阴离子交换剂属性;环境pH值高于两性解离共价修饰层等电点时,两性解离共价修饰层的表面净电荷为负,具有阳离子交换剂属性;本发明的分离介质在等电点两侧分别具有阴离子交换剂属性和阳离子交换剂属性,调节洗脱液pH使分离介质表面和目标物质净电荷相同而产生静电排斥能释放目标物质,既增强了洗脱效力也避免了用高浓度无机离子的后续问题,是分离容量高、温和条件下被吸附离子洗脱效力高、能够标定分离容量、对疏水小分子非特异吸附低、温和条件下再生的新型离子交换介质。